腺病毒介导反义血管紧张素Ⅱ1型受体cDNA对人肺动脉平滑肌细胞生物学行为的影响

摘要

目的探讨腺病毒介导的反义血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）1型受体（AT1R）cDNA转染对培养的人肺动脉平滑肌细胞（PASMC）迁移、增殖和凋亡的影响。方法构建重组反义人AT1R腺病毒（AdCMVahAT1）和表达β半乳糖苷酶的对照腺病毒载体AdCMVLacZ,将培养的PASMC分为DMEM组、AdCMVLacZ组和AdCMVahAT1组,分别给予不同的干预因素干预PASMC,用半定量逆转录聚合酶链反应（RT PCR）和免疫组化及彩色图像分析法检测AT1R的表达情况,并用改良的迁移小室进行细胞迁移实验。又将培养的PASMC分为DMEM组,AngⅡ组,AdCMVLacZ+AngⅡ组和AdCMVahAT1+AngⅡ组,用流式细胞仪检测各组PASMC的增殖指数和凋亡率,绘制DNA合成直方图。结果转染AdCMVahAT1后48h的PASMC,AT1RmRNA明显低于对照组[AT1R/βactin吸光度（A）比值:AdCMVahAT1组为0.48,DMEM组为0.97,AdCMVLacZ组为0.96];AdCMVahAT1组AT1R蛋白表达水平（A值为176.39±21.63）显著低于DMEM组（A值为310.21±29.82）和AdCMVLacZ组（A值为306.45±30.09）,差异均有统计学意义（P均＜0.01）,转染AdCMVahAT1后24h的PASMC迁移距离为（40.93±9.69）μm,显著短于DMEM组的（78.23±11.79）μm和AdCMVLacZ组的（77.80±10.66）μm,差异均有统计学意义（P均＜0.01）。给予AngⅡ刺激48h,AngⅡ组PASMC的增殖指数（59.69±3.46）显著高于