海莲耐盐基因AOC克隆及转录融合表达载体的构建

摘要

利用RT-PCR的方法从红树林海莲中克隆丙二烯环化氧化酶基因(AOC),并进行序列测定和BLAST程序进行同源序列分析.从RT-PCR得到的产物,其核苷酸序列与GeneBank中海莲丙二烯环化氧化酶基因AOC(BAB21610)的核苷酸序列完全相同.AOC基因通过中间载体pBS-AOC,pJIT60-AOC,最后克隆到植物表达载体pGreenⅡ0229上,得到双35S的pGreenⅡ0229-AOC植物表达载体.AOC基因和ipt基因通过中间载体pBS-AOC,pBS-ipt,pBS-AOC-ipt,pJIT60-AOC-ipt;最后将AOC和ipt基因以转录融合的方式克隆到植物表达载体pGreenⅡ0229上,得到具有双35S启动子的AOC,ipt双基因转录融合的植物表达载体pGreenⅡ0229-AOC-ipt.