巴西橡胶树HbMADS4的克隆及原核表达分析

摘要

为了探讨巴西橡胶树自根幼态无性系高产的分子机制,通过抑制缩减杂交获得了在巴西橡胶树自根幼态无性系和老态无性系胶乳中差异表达的基因片段.为进一步鉴定差异表达基因的功能,对相关基因进行克隆.通过RACE方法克隆一个新的橡胶树MADS-box转录因子基因(命名为Hb MA DS4),HbMA DS4全长984 bp,含有633 bp的阅读框,编码230个氨基酸.推测HbMADS4蛋白分子量为23.71 ku,等电点为7.61,在N端含有典型的MADS-box结构域.构建HbMADS4原核表达载体pHbMADS4,将其转化E.coli,经优化条件后,在20℃,0.1 mmol/L IPTG诱导4h的条件下,获得HbMADS4融合蛋白.Hb MA DS4的克隆和HbMADS4融合蛋白的获得为深入研究HbMADS4的功能奠定基础.