肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2对小鼠调节性T细胞免疫调节功能的影响

摘要

目的观察肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样分子2（tumor necrosis factor-αinduced protein 8 like-2,TIPE2）在CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+CD25+Treg细胞）中的表达,并进一步分析其对CD4+CD25+Tug细胞免疫抑制活性的影响。方法免疫磁珠法分选正常BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞。采用RT-PCR和Western blot技术分别从mRNA和蛋白水平检测CD4+CD25+Treg细胞细胞内TIPE2表达。进一步应用小RNA干扰技术（siRNA）沉默TIPE2表达,流式细胞术观察TIPE2对T淋巴细胞毒性相关抗原（CTLA）-4及叉头翼状螺旋转录因子（Foxp3）表达的影响,ELLSA法检测CD4+CD25+Treg细胞分泌IL-10和转化生长因子-（TGF）-β水平,并通过MTT比色试验观察效应T细胞增殖活性的改变结果RT-PCR分析在CD4+CD25+Treg细胞中检测到147 bp大小的特异性TIPE2目的基因条带。Western blot检测证实CD4+CD25+Treg细胞中存在清楚的TIPF2条带,相对分子质量为21 000。siRNA处理CD4+CD25+Treg细胞后,经抗CD3/CD28刺激活化的CD4+CD25+Treg细胞培养24 h时CTLA-4和Foxp3表达明显下降（P＜0.01）,同时IL-10和TGF-β生成量显著减少（P＜0.01）;此外,CD4+CD25+Treg细胞对CD4+C1D25-T细胞的抑制功能明显减弱（P＜0.05）,结论TIPE2作为一种重要的负向调控分子,在CD4+CD25+Treg细胞中表达并影响CD4+CD25+Treg细胞的免疫抑制功能