局部应用霉酚酸酯抑制成纤维细胞增殖及迁移预防硬膜外纤维化

摘要

背景:研究发现,椎板切除术后的硬膜外纤维化主要由成纤维细胞增殖及迁移造成,而霉酚酸酯能够抑制成纤维细胞的增殖和迁移.目的:探讨局部应用霉酚酸酯预防椎板切除术后硬膜外纤维化的作用及其可能机制.方法:①细胞实验:分别以0,0.01,0.1,1,10,100μmol/L的霉酚酸酯溶液处理成纤维细胞24 h,采用CCK-8法检测细胞活性,选择较适宜的处理浓度进行后续的细胞实验.分别以0,0.1,1,10μmol/L的霉酚酸酯溶液处理成纤维细胞24 h,EdU和细胞周期实验检测细胞增殖情况,划痕实验与Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力,Western blot检测细胞增殖相关蛋白(细胞核增殖抗原、Cyclin D1)与迁移相关蛋白(α-微管蛋白、黏着斑蛋白)的表达量.②动物实验:取48只成年SD大鼠,构建大鼠椎板切除模型,随机分4组:对照组将浸透生理盐水的棉片置于术后骨缺损区域,低、中、高浓度组分别将浸透2.5,5,10 g/L霉酚酸酯溶液的棉片置于术后骨缺损区域,术后4周取术区椎体进行组织学分析.结果 与结论:①细胞实验结果:CCK-8检测显示,霉酚酸酯呈浓度依赖性抑制成纤维细胞的活性;EdU实验显示,霉酚酸酯呈浓度依赖性抑制成纤维细胞的增殖;流式细胞仪检测显示,0.1μmol/L的霉酚酸酯溶液使细胞周期停滞在G0/G1期;划痕实验与Transwell实验显示,霉酚酸酯呈浓度依赖性抑制成纤维细胞的迁移能力;Western blot检测显示,霉酚酸酯呈浓度依赖性抑制成纤维细胞增殖相关蛋白与迁移相关蛋白的表达;②动物实验结果:组织学观察显示,随着霉酚酸酯浓度增加,术区纤维化组织中成纤维细胞数量与胶原生成逐渐减少;③结果 表明,椎板切除术后局部应用霉酚酸酯可有效预防硬膜外纤维化的发生,可能是通过抑制成纤维细胞的增殖和迁移发挥作用.