促炎脂肪因子Chemerin促进一氧化氮表达调节软骨细胞的增殖与代谢

摘要

背景:骨关节炎的关键病理特征体现为炎症致软骨的退变,而软骨细胞是软骨中的唯一细胞,其受损首当其冲.有研究表明Chemerin可刺激白细胞向炎症部位迁移,增加软骨细胞的炎症信号,提示Chemerin在关节炎症中有所作用.前期课题组研究发现,骨关节炎患者的血清中的Chemerin水平明显升高,关节滑液中的Chemerin水平与以Kellgren-Lawrence分级为标准的骨关节炎严重程度相关,Chemerin在骨关节炎中可能作为炎症因子起重要作用.目的:探讨Chemerin对软骨细胞增殖、代谢的影响.方法:用Ⅱ型胶原酶消化法分离新生乳鼠软骨细胞并培养,建立细胞生长曲线,用MTT法筛选对正常软骨细胞有毒性的Chemerin浓度范围.用白细胞介素1β(10μg/L)构建骨关节炎的体外细胞模型.软骨细胞在药物存在下处理2 d后,通过苏木精-伊红染色、番红O染色、二乙酸荧光素/碘化丙啶染色、观察细胞形态和增殖代谢;另检测细胞一氧化氮分泌量分析诱导型一氧化氮合酶(一氧化氮合酶2)的表达;同时使用荧光定量PCR检测软骨形成标志基因如蛋白聚糖、Ⅱ型胶原a1,分解代谢基因如基质金属蛋白酶13、一氧化氮合酶2基因的表达变化.结果与结论:①体外培养的软骨细胞活性、形态良好;②Chemerin(50μg/L)及白细胞介素1β(10μg/L)均可减少细胞外基质的合成,促进细胞分泌一氧化氮和凋亡;③荧光定量PCR结果进一步显示Chemerin和白细胞介素1β作用相似,可下调软骨形成标志基因表达及上调软骨细胞分解代谢基因表达;④结果表明,Chemerin作为一种促炎症因子能促进软骨细胞一氧化氮高表达,调节细胞代谢平衡,促进细胞凋亡,并与白细胞介素1β具有协同作用.