脱细胞软骨细胞外基质对小鼠巨噬细胞系表型的调控

摘要

背景:前期研究证实脱细胞软骨细胞外基质可有效促进关节软骨缺损修复再生,具有良好的修复效果,但是其促再生机制尚未阐明。目的:探究猪来源脱细胞软骨细胞外基质支架对小鼠巨噬细胞系表型极化的调控。方法:以猪膝关节软骨为原料,通过湿法粉碎、差速离心、冷冻干燥的方法制备脱细胞软骨细胞外基质支架。将小鼠RAW264.7巨噬细胞系接种于脱细胞软骨细胞外基质支架,构建细胞-支架复合物,体外极化诱导4 d,采用扫描电镜观察细胞黏附情况,死/活细胞染色观察细胞生长情况,免疫荧光染色观察M1型巨噬细胞特征性表面标志物CD86和M2型巨噬细胞特征性表面标志物CD206的表达,进而明确极化诱导情况。结果与结论:①扫描电镜显示,复合物中的巨噬细胞为原来的圆形或类圆形,沿着支架的管状排列,广泛分布在支架表面及内部结构中;②死/活细胞染色显示,支架上附着的大部分细胞为活细胞,仅有极少数死细胞;③免疫荧光染色显示,复合物中的M2型巨噬细胞标志物CD206呈80%的高阳性表达,M1型巨噬细胞标志物CD86的阳性表达甚少;④结果表明,猪来源脱细胞软骨细胞外基质支架可诱导极化M0型巨噬细胞为修复性M2型巨噬细胞。