建立血管内皮细胞敲除DEPTOR基因小鼠模型及鉴定

摘要

背景:目前关于DEPTOR与血管类疾病的研究较少,在动物体内研究尚未发现,因此建立一种新的血管内皮特异性敲除DEPTOR的小鼠模型对于研究DEPTOR与血管类疾病的关系尤为重要.目的:建立血管内皮细胞敲除DEPTOR基因纯合子小鼠模型,并进行鉴定.方法:Cre小鼠,DEPTORflox/+雄鼠,均购于美国Jackson实验室;C57野生型小鼠购自华中科技大学.实验方案经中国人民解放军中部战区总医院动物实验伦理委员会批准(批准号:20120034).选取5只DEPTORflox/+雄鼠与10只DEPTOR flox/+雌鼠进行交配,得到基因型为EPTORflox/flox及DEPTORflox/+的F1子代小鼠35只,与8只血管内皮细胞特异性表达Tek+重组酶的Cre小鼠进行交配,一共得到基因型为Tek-Cre+×DEPTORflox/flox和DEPTORflox/flox子代小鼠共65只.采用PCR法进行DEPTORflox及Cre基因型鉴定,记录Tek-Cre+×DEPTORflox/flox小鼠与DEPTORflox/flox小鼠2月龄的体长及体质量,采用Western blotting法检测2组小鼠肝脏组织DEPTOR蛋白相对表达量,免疫荧光检测两组小鼠血管内皮细胞DEPTOR的表达.结果与结论:①得到基因型为Tek-Cre+×DEPTORflox/flox小鼠共25只、DEPTORflox/flox小鼠共40只,其体长分别为(18.61±1.14),(18.65±1.40)cm,体质量分别为(25.84±1.99),(25.06±2.15)g,二者比较差异均无显著性意义(均P>0.05);②Tek-Cre+×DEPTORflox/flox小鼠与DEPTORflox/flox小鼠肝脏组织DEPTOR蛋白相对表达量分别为0.28±0.02,0.82±0.04,二者比较P<0.05;③血管内皮细胞DEPTOR阳染率分别为(73.67±2.87)％,(10.33±1.54)％,二者比较P<0.05;④结果证实成功敲除了Tek-Cre+×DEPTORflox/flox小鼠的血管内皮细胞的DEPTOR基因;说明成功构建了血管内皮细胞敲除DEPTOR基因纯合子小鼠模型,并经基因型及蛋白组织水平鉴定.