超顺磁性氧化铁标记对诱导多功能干细胞体外分化的影响

摘要

背景：超顺磁性氧化铁标记技术是一种经典的干细胞活体无创示踪手段,目前已广泛应用于干细胞移植相关的基础与临床研究中.诱导多功能干细胞是目前最有潜力用于细胞移植治疗的种子细胞之一,超顺磁性氧化铁标记技术是否也能够用于诱导多功能干细胞的无创示踪,关键看该材料标记后是否严重影响细胞的分化,目前这方面的研究鲜有报道.目的：探究超顺磁性氧化铁标记对诱导多功能干细胞体外分化的影响.方法：分离、培养大鼠皮肤成纤维细胞,用高效重组载体和病毒包装含有目的基因（Oct4,Sox2,Klf4和c-Myc）的质粒共转染293T细胞,进行病毒包装和生产.使用包装有目的基因的慢病毒载体感染大鼠皮肤成纤维细胞,得到诱导多功能干细胞.实验分2组：实验组诱导多功能干细胞采用超顺磁性氧化铁体外标记后行神经诱导分化,对照组诱导多功能干细胞（未用超顺磁性氧化铁体外标记）直接行神经诱导分化.对磁标记诱导多功能干细胞进行普鲁士蓝染色和透射电镜观察.免疫组化检测诱导分化后神经元特异性烯醇化酶的表达,流式细胞仪检测分化为神经元样细胞及胶质样细胞的比例.结果与结论：①超顺磁性氧化铁粒子标记后普鲁士染色和透射电镜观察可见细胞胞浆内含致密铁颗粒;②诱导多功能干细胞进行神经诱导分化后神经元特异性烯醇化酶呈阳性表达;③实验组诱导多功能干细胞分化为神经元样细胞及胶质样细胞的比例与对照组相比差异无显著性意义（P 〉 0.05）;④结果表明,超顺磁性氧化铁粒子标记对诱导多功能干细胞向神经元样细胞分化无明显影响,合理应用这种新型细胞标记术将促进对再生医学种子细胞的研究.