淀粉样前体蛋白过度表达细胞模型的建立及对细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的:建立淀粉样前体蛋白过度表达的细胞模型,并观察其对PC12细胞形态及细胞增殖的影响和在氧化应激损伤时,对细胞生长及凋亡的影响。方法:实验于2003-09/2004-12在哈尔滨医科大学遗传与细胞生物学教研室完成。用脂质体转染对数生长期的PC12细胞,细胞分为3组:转染真核表达载体的正常对照组;淀粉样前体蛋白过度表达组;642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变淀粉样前体蛋白过度表达组,建立稳定表达的细胞株。用Western印迹法验证转染效果。使用细胞形态学方法、四甲基氮唑兰法观察对细胞形态和生长的影响;使用四甲基氮唑兰法、Hoechst33342观察在无血清培养24h后,100μmol/L过氧化氢作用4h对PC12细胞(经神经生长因子处理分化为交感神经元样细胞而接近于神经元)的影响。结果:①Western印迹法结果:转染真核表达载体的正常对照组无人的淀粉样前体蛋白表达,而淀粉样前体蛋白过度表达组和642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变:淀粉样前体蛋白过度表达组有人的淀粉样前体蛋白表达,说明转染成功。②野生型淀粉样前体蛋白和突变型642位由缬氨酸突变为异亮氨酸的突变:淀粉样前体蛋白过度表达组基因转染PC12细胞后,与转染真核表达载体的正常对照组相比细胞形态及细胞突起的数量和长度无明显改变。③四甲基氮唑兰法测定结?