核因子κB信号转导途径在大鼠实验性骨性关节炎软骨细胞中被激活

摘要

目的:验证核因子κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)信号转导途径在骨性关节炎软骨细胞中被激活的假说.方法:实验于2005-07/09在南京大学生命科学院动物实验室完成.选取SPF级SD大鼠20只,均取左膝为骨性关节炎模型组,右膝为空白对照组.①骨性关节炎模型组行前交叉韧带切断术建立模型,术毕腹腔注射丁胺卡那(20 mg/只)预防感染,连用3 d.空白对照组不做处理.②术后6周取材.取膝前正中切口,离断关节周围肌肉,在股骨髁上剪断股骨,平台下方1 cm剪断胫骨,取下游离的膝关节,剪断关节囊和内外侧韧带分开股骨髁和胫骨端,胫骨进行病理学实验,股骨进行分子生物学实验.将胫骨标本投入0.5 mol/L的乙二胺四乙酸中脱钙8周,制作5 μm切片,利用苏木精-伊红及甲苯胺蓝染色观察胫骨关节面的破坏程度,以Western-blot免疫印迹分析定量检测股骨髁软骨细胞NF-κB信号转导途径的激活程度(p65灰度积分).结果:实验选取SD大鼠20只,全部进入结果分析.①术后6周两组关节软骨组织病理学检查结果:苏木精-伊红染色及甲苯胺蓝染色显示,空白对照组关节软骨表面平整,骨性关节炎模型组关节软骨表面破坏,粗糙不平.②两组p65条带灰度积分计算结果的比较:骨性关节炎模型组的灰度积分明显高于空白对照组(0.832±0.112,0.372±0.081,P＜0.05).结论:NF-κB信号转导途径在大鼠实验性骨性关节炎软骨细胞中被激活.