银杏内酯B与低氧预适应对氧-葡萄糖剥夺星形胶质细胞的保护途径

摘要

目的:观察银杏内酯B与低氧预适应对氧葡-萄糖剥夺模型中星形胶质细胞的影响,分析该影响作用途径。方法:实验于2004-10/2005-10在南通大学航海医学研究所完成。①选用新生1d的ICR小鼠15只,雌雄不拘。②传3代后的星形胶质细胞,将培养基换成无糖DMEM培养,加入银杏内酯B,置入体积分数0.95空气+体积分数0.05CO2培养箱24h后,进行氧-葡萄糖剥夺实验,培养基换成无糖Hank溶液,置37°C体积分数0.01O2+体积分数0.94N2+体积分数0.05CO2培养箱进行缺氧24h后,换成含150g/L新生牛血清的DMEM/F12完全培养液在体积分数0.95空气+体积分数0.05CO2培养箱复氧24h。③低氧预适应0.5或3h,用原完全培养基培养24h后进行氧-葡萄糖剥夺实验。④利用相差显微镜观察细胞形态变化;四甲基偶氮唑盐比色法测定线粒体脱氢酶活性。免疫印迹分析促红细胞生成素表达的变化。⑤计量资料差异比较采用单因素方差分析,组间差异比较采用Q检验(Newman-Keuls法)。结果:①氧-葡萄糖剥夺实验对星形胶质细胞活性的影响:氧-葡萄糖剥夺0.5或3h后星形胶质细胞活性增强;氧-葡萄糖剥夺24h后,细胞活性明显下降(P<0.01)。②银杏内酯B对氧-葡萄糖剥夺24h后星形胶质细胞活性的影响:预先给予120μmol/L银杏内酯B作用24h,再进行氧-葡萄糖剥夺24h,细胞形态基本正常;在一定浓度范围内银杏内酯B对缺氧损伤有明显的保护作用,以120μmol/L银杏内酯B预处理后细胞活性明显高于氧-葡萄糖剥夺24h后(P<0.01)。③银杏内酯B(120μmol/L)对氧-葡萄糖剥夺24h后星形胶质细胞表达促红细胞生成素的影响:经氧-葡萄糖剥夺0.5或3h或单纯用银杏内酯B处理后的比值明显高于未进行氧-葡萄糖剥夺者(P<0.01);银杏内酯B预处理后再进行氧-葡萄糖剥夺24h表达明显高于氧-葡萄糖剥夺24h后(P<0.05)。④低氧预适应对氧-葡萄糖剥夺24h后星形胶质细胞活性的影响:低氧预适应0.5和3h后再进行氧-葡萄糖剥夺24h,细胞形态基本正常;低氧预适应0.5和3h对氧-葡萄糖剥夺24h后星形胶质细胞有保护作用(P<0.01,0.05)。结论:银杏内酯B与低氧预适应对氧-葡萄糖剥夺星形胶质细胞有保护作用,其作用发生可能与促进促红细胞生成素表达有关。