内毒素预处理对大鼠急性局灶脑缺血的影响

摘要

目的:观察经内毒素预处理后急性局灶脑缺血大鼠脑梗死体积、凋亡细胞数和凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达的变化.探讨内毒素预处理对急性局灶脑缺血损伤大鼠脑功能的保护作用.方法:实验于2004-11/2005-02在沈阳市第五人民医院动物室完成.采用Haruo Nagasawa法制作大鼠局灶脑缺血模型.将48只健康成年Wistar大鼠随机分为3组:生理盐水对照组、内毒素预处理组、缺血预处理组,每组16只.内毒素预处理组大鼠在局灶脑缺血模型制备前3 d,皮下注射内毒素0.05 mg/kg;缺血预处理组大鼠在第一次缺血预处理再灌注3 d后再次麻醉大鼠,把插线再次推进到第一次插线深度,停留60 min后,将线退出;生理盐水对照组大鼠在局灶脑缺血模型制备前3 d,皮下注射生理盐水0.2 mL.各组大鼠在局灶脑缺血1 h再灌注23 h后断头取脑,红四氯氮唑染色观察大鼠脑梗死的体积;多聚甲醛固定,石蜡包埋,连续切片,原位细胞凋亡检测法观察神经细胞凋亡情况,免疫组化染色观察Bcl-2蛋白表达的变化.结果:各组大鼠在实验过程中无死亡,均进入结果分析.①红四氯氮唑染色显示缺血预处理组和内毒素预处理组的梗死体积较生理盐水对照组明显减小,差异有显著性意义[(64±14.74),(71.3±10.35),(159±9.79)mm3,P＜0.01].②缺血预处理组和内毒素预处理组仅可见散在的凋亡细胞出现于皮质、胼胝体及基底节区.生理盐水对照组梗死灶周围的半暗带内可见大量神经元胶质细胞及部分血管内皮细胞发生凋亡.缺血预处理组和内毒素预处理组梗死灶周围的凋亡细胞数较生理盐水对照组明显减少[(33.5±7.45),(35.6±4.18),(57.88±0.96)个/切片,P＜0.01].③缺血预处理组和内毒素预处理组缺血侧大脑半球Bcl-2阳性细胞数明显增加,生理盐水对照组在缺血侧梗死周边区Bcl-2蛋白表达也增加.但缺血预处理组和内毒素预处理组缺血侧大脑半球Bcl-2阳性细胞数比生理盐水对照组增加明显[(111.38±13.59),(105.88±9.99)(47.5±11.43),P＜0.01].结论:小剂量内毒素预处理可以通过调节细胞内凋亡抑制基因Bcl-2蛋白的表达诱导抗凋亡,启动内源性保护机制,产生缺血耐受,从而减少梗死面积.