脱细胞角膜基质与骨髓间充质干细胞复合构建组织工程化活性人工角膜

摘要

目的:观察以脱细胞角膜基质作为支架材料、以骨髓间充质干细胞作为种子细胞复合构建组织工程化人工活性角膜的可行性.方法:实验于2004-09/2005-06在南昌大学江西医学院烧伤研究所完成.①取兔新鲜角膜,浸入1.25g/L胰蛋白酶和0.1 g/L乙二胺四乙酸溶液中作用24 h,然后浸入1%曲拉通X-100溶液中作用120 h,制备成脱细胞角膜基质,进行常规组织学苏木精-伊红染色观察.②采用密度梯度离心结合贴壁法分离纯化人骨髓间充质干细胞,用含10μg/L表皮生长因子的Dulbecco最低必需培养基进行诱导培养.③将经诱导培养的骨髓间充质干细胞种植于脱细胞角膜基质上,复合构建组织工程化人工活性角膜,观察细胞与材料的黏附、细胞增殖情况.结果:①脱细胞角膜基质主要由胶原纤维组成,未见细胞成分残留.②经表皮生长因子诱导培养的人骨髓间充质干细胞体外增殖良好,24 h后贴壁细胞增多,7～10 d细胞多为梭形,呈有规则的集束辐射状排列;14～21 d左右细胞基本融合.③将人骨髓间充质干细胞种植于脱细胞角膜基质上,细胞铺展和增殖良好.结论:以骨髓间充质干细胞作为种子细胞复合脱细胞角膜基质支架材料可成功构建组织工程化人工活性角膜,有望成为一种修复角膜缺损的新技术方法.