人胚胎嗅鞘细胞的分离培养与纯化

摘要

目的:大量的实验证实,嗅鞘细胞是能促进已损伤的中枢神经重新恢复功能最有效的种子细胞之一。实验拟建立一种简便易行、省时、经济,临床应用更安全,临床效果更好的培养和纯化嗅鞘细胞的方法。方法:实验于2004-12/2006-12在山东省泰安荣军医院细胞实验室完成。流产胚胎(4～6个月,由家属自愿捐献)。实验方法:在无菌条件下,用显微外科器械将胚胎的嗅球取出,在解剖显微镜下仔细剥离嗅球表面的软膜和血管,尽量保持嗅球完整性,然后用眼科剪反复剪碎,剪成0.5～1.0mm3大小的组织块,将组织块移入离心管内,加入含有13%胎牛血清的D/F12培养液,用弯头吸管来回轻轻吹打组织块制成细胞悬液,用含有阿糖胞苷的无血清纯化液纯化嗅鞘细胞,胰蛋白酶消化收集细胞,制成单细胞悬液并进行计数。结果:胚胎嗅鞘细胞在24h后开始部分贴壁,胞体呈球形、星形,有一个甚至多个突起,但突起短小。贴壁3d后,大部分细胞迅速生长,突起延伸变长。贴壁5～7d后,随着培养时间的延长,嗅鞘细胞成簇密集排列生长,细胞突起相互交织越来越多,形成网状。可见3种比较典型的嗅鞘细胞:双极或梭形、多突起形和扁圆或油煎蛋形。主要以梭形和多突起形细胞为主。细胞培养至7～14d时细胞数量不再有明显增加,但是细胞仍生长旺盛,活性好,细胞纯度高达95%～98%。结论:实验建立的人胚胎嗅鞘细胞培养的方法简便易行,经济,细胞纯度较高。