三七总皂甙对人肝癌细胞缝隙连接细胞间通讯的调节机制

摘要

目的:观察三七总皂甙对人肝癌细胞SMMC-7721缝隙连接细胞间通讯、以及缝隙连接蛋白32mRNA和磷酸化细胞外信号调节激酶1/2表达的影响。方法:实验于2005-08/2006-03在江西省分子医学重点实验室完成。①实验操作:SMMC-7721细胞用含100mg/L,200mg/L,400mg/L三七总皂甙的培养液预处理,对照组SMMC-7721细胞不加三七总皂甙。②实验评估:采用划痕标记/染料示踪技术检测缝隙连接细胞间通讯的变化;采用反转录-聚合酶链反应检测缝隙连接蛋白32mRNA水平;采用流式细胞仪检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的表达。结果:①对照组染料局限于划痕两侧的细胞内,无明显的荧光染料传输,GJIC阴性;三七总皂甙可上调染料传输范围,且随三七总皂甙剂量增高,染料传输范围逐渐增大,最远可达三四层细胞。②反转录-聚合酶链反应结果显示,各组细胞缝隙连接蛋白32mRNA水平差异无显著性意义(P>0.05)。③流式细胞仪结果显示,对照组SMMC-7721细胞磷酸化细胞外信号调节激酶1/2表达的阳性率较高,伴随三七总皂甙剂量增加磷酸化细胞外信号调节激酶1/2表达的阳性率逐渐下降,呈一定的剂量依赖效应。结论:三七总皂甙可能通过抑制SMMC-7721细胞磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的活化减少缝隙连接蛋白32的磷酸化,进而上调SMMC-7721细胞的缝隙连接细胞间通讯功能。