不同预湿方法对构建组织工程骨膜细胞黏附率的影响

摘要

目的:将经成骨诱导的兔骨髓来源的间充质干细胞与猪小肠黏膜下层复合,构建的组织工程骨膜,与天然骨膜在形态结构和功能上非常类似.实验着重观察不同预湿方法对构建的组织工程骨膜细胞黏附率的影响,为有效构建组织工程化骨膜奠定理论基础.方法:实验于2005-09/2007-03在兰州大学附属第二医院骨科研究所完成.①实验材料:20 d的新西兰纯种兔2只.②实验过程及分组:取健康新西兰幼兔骨髓,密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞并进行体外扩增、诱导分化,然后与经过胎牛血清(实验组)、磷酸盐缓冲液(对照组)预湿处理的猪小肠黏膜下层复合构建组织工程骨膜,体外培养2周.③实验评估:计算贴附率、测定碱性磷酸酶活性,并用倒置显微镜、扫描电镜观察生长、分裂、增殖情况.结果:①细胞贴附率:接种后5h实验组细胞贴附率高于对照组[(57.34±2.23)%,(39.16±5.22)%,P＜0.01];12 h实验组细胞贴附率高于对照组[(72.45±1.15)%,(54.47±3.46)%,P＜0.01].②倒置显微镜观察:实验组比对照组更易黏附、伸展.③扫描电镜观察:复合培养第3天,实验组可见材料表面的细胞已完全伸展,附着在材料表面;对照组细胞大多呈不规则形,未完全伸展.培养7 d以后两组细胞差异不大.④碱性磷酸酶活性测定:复合培养第5,10,14天,实验组的碱性磷酸酶活性均明显高于对照组,差异有非常显著性(P＜0.01).结论:用胎牛血清预湿小肠黏膜下层,有利于提高接种效率,从而能更有效的构建组织工程骨膜.