基因转染促骨髓间质前体细胞体外向软骨的分化

摘要

目的：骨髓中包含的间质前体细胞在适宜的条件下可以被许多细胞因子诱导分化为软骨。采用基因转染技术观察转化生长因子β2对体外培养的骨髓间质前体细胞向软骨分化的影响。方法：实验于2005-12/2007-01在中日友好医院临床研究所骨科实验室完成。①骨髓标本来源于6名志愿者,对治疗及实验均签署知情同意书,实验经医院医学伦理委员会批准。②实验方法：志愿者局麻下行骨髓穿刺,抽取7.0～10.0mL骨髓抗凝,以密度梯度离心法分离人骨髓间质前体细胞,通过脂质体介导转染技术,将pcDNA3.1（＋）TGF-β2载体导入骨髓间质前体细胞中,体外单层培养。③实验评估：利用RT-PCR、WesternBlotting和免疫组化法检测转化生长因子β2和软骨相关基因、蛋白的表达情况。结果：①转染后48h,可检测到明显的转化生长因子β2mRNA表达,Ⅱ型胶原A1和AggrecanmRNA均有轻微表达;转染后4周,转化生长因子β2mRNA表达稍有降低,Ⅱ型胶原A1和AggrecanmRNA表达均明显上调。②转染后48h和4周,间质前体细胞培养上清液中均有转化生长因子β2蛋白的表达。③转染后48h部分细胞显示Ⅱ型胶原蛋白免疫组化阳性信号,转染后4周Ⅱ型胶原蛋白阳性细胞数增加。结论：pcDNA3.1（＋）/TGF-β2真核表达载体在骨髓间质前体细胞内可获得短暂和长期表达。在单层培养的情况下,骨髓间质前体细胞可被转化生长因子β2诱导向软骨方向分化。