机械牵张人牙周膜成纤维细胞钙离子通道的变化

摘要

背景:当机械牵张力作用到细胞上,通过激活钙离子通道以改变胞内Ca2+浓度,引发细胞功能的相应改变。目的:应用激光共聚焦显微成像技术观察钙通道阻滞剂对机械牵张力下,钙离子浓度变化的影响。设计、时间及地点:细胞学观察实验,于2007-03/2008-08在哈尔滨医科大学药理学院完成。材料:硝苯地平、氯化镉购自美国SIGMA公司。12～16岁青少年因正畸目的拔除的双尖牙。方法:以酶消化组织快法培养人牙周膜成纤维细胞,采用体外细胞加力装置给细胞加力,按弹力形变8%、12%加力2,4h后,分别加入10,20μmol硝苯地平及10μmol氯化镉,同时设单纯加力和正常对照组,共17组。经Fluo-3/AM负载后,在激光共聚焦显微镜下观察人牙膜成纤维细胞在不同加力时间以及弹性形变的荧光强度变化。主要观察指标:激光共聚焦显微镜下观察人牙周膜成纤维细胞荧光强度变化及钙离子浓度变化。结果:单纯加力人牙周膜成纤维细胞中钙离子浓度升高明显,细胞亮度明显增强,加入硝苯地平10,20μmol后,随着药物浓度增高,细胞亮度逐渐减弱,加入氯化镉后,细胞亮度减弱更加明显。人牙周膜成纤维细胞弹力形变8%,细胞加力2h后,细胞内钙离子浓度明显升高(P<0.01),加入10,20μmol硝苯地平后,随着药物浓度的增加,细胞内钙浓度逐渐降低(P<0.01),但高于正常对照组,加入氯化镉后,细胞内钙浓度下降比硝苯地平组更加明显(P<0.01),但高于正常组。弹力形变8%+细胞加力4h组、弹力形变12%+细胞加力2h组、弹力形变12%+细胞加力4h后与弹力形变8%,细胞加力2h组结果一致。结论:单纯加力可以提高人牙周膜成纤维细胞中钙离子浓度,与弹性形变、加力时间无关。硝苯地平和氯化镉可以降低人牙周膜成纤维细胞内钙离子浓度,氯化镉作用更强。