没食子儿茶素没食子酸酯抑制牛主动脉内皮细胞增殖和对细胞周期分布的影响

摘要

背景:血管内皮细胞在肿瘤血管生成中起关键作用,没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)可抑制内皮细胞生长和增殖,但其作用机制仍不清楚。目的:观察没食子儿茶素没食子酸酯对牛主动脉内皮细胞增殖和细胞周期分布的影响。设计、时间及地点:以细胞为观察对象的随机分组实验,于2006-08/2008-05在广州医学院完成。材料:出生1d、未哺乳的新生牛,取主动脉内皮细胞进行原代培养。方法:将指数生长期密度为5×107L-1的牛主动脉内皮细胞接种于96孔培养板,实验分为2组:实验组和对照组分别加入以培养基RPMI1640配制的不同浓度的EGCG180μL(终浓度为5,10,20,40,80g/L)及等体积不含EGCG的培养基,全自动酶标仪上测定不同时间3,6,12,24,36h各孔吸光度值,并计算细胞生长抑制率。选择适当的药物浓度和作用时间点进行EGCG抑制作用的半数抑制浓度(IC50)实验。收集对数生长期的牛主动脉内皮细胞,实验组加入不同浓度(10,20,30,40g/L)的EGCG,对照组加入不含药物的培养基,Multicycle软件分析G1/G0期、S期和G2/M期细胞所占比例。主要观察指标:①不同剂量EGCG在不同时间点对牛主动脉内皮细胞生长、增殖的影响。②运用直线回归分析EGCG对牛主动脉内皮细胞抑制的IC50。③流式细胞仪检测EGCG对内皮细胞周期分布的影响。结果:①EGCG呈剂量及时间依赖性抑制内皮细胞的增殖:EGCG作用12h后,细胞抑制率达高峰,此后其抑制率逐渐下降(P0.05)。②在3,6,12,24h和36h等时间点EGCG的IC50分别为23.14,18.79,13.23,14.19,17.45g/L,IC50在12h达高峰,时间继续延长,作用并不增加。③各组G2/M期细胞所占比率无明显差异(P>0.05)。S期细胞比率由(58.02±1.21)%下降为(27.62±3.12)%,其中30g/L和40g/L剂量组与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.01)。G0/G1期细胞比率由(29.22±3.21)%上升到(62.32±4.11)%,其中30g/L和40g/L剂量组与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:EGCG在体外能有效抑制牛主动脉内皮细胞增殖,且使其周期主要受阻于G0/G1期,可能是其抑制内皮细胞增殖的机制之一。