改良Dexter法与IMDM培养基培养骨髓基质细胞的比较

摘要

背景：体外分离培养骨髓基质细胞,并于骨髓移植后将其注入严重联合免疫缺陷鼠体内,对于促进造血及免疫重建尤为必要。目的：比较骨髓基质细胞在不同培养条件下的生长状况,寻找一种体外分离培养扩增骨髓基质细胞简单而实用的方法。设计、时间及地点：体外对比观察实验,于2006-07/2007-01在太原市中心医院皮肤科实验室完成。材料：人骨髓取自太原市中心医院血液科经筛选的正常骨髓（取材均经患者同意）。方法：分离人骨髓单个核细胞,对照组采用改良Dexter法培养：将骨髓单个核细胞用5×10^-7mol/L氢化可的松的RPMI1640培养基调整细胞浓度为1×10^9L^-1,以每孔1mL接种于24孔培养板,培养2d后全量换液,去除非贴壁细胞,之后每3d半量换液1次。细胞生长至半融合状态时传代,传两三代后用胰酶消化,收集细胞,液氮冷冻保存。实验组用IMDM培养基培养：用不含氢化可的松的IMDM培养基培养,其余成分及培养条件均与对照组相同。2d后全量换液,去除非贴壁细胞,之后每4天半量换液1次。传代及收集方法同对照组。主要观察指标：通过倒置显微镜观察细胞贴壁情况、形态变化及增殖状态,MTT比色法检测细胞增殖活性。结果：倒置显微镜下,两组培养细胞在接种24h后细胞大量贴壁并伸展开,随着培养时间延长,贴壁细胞数量增多,14d左右细胞铺满板底达融合状态。传代细胞经消化后变形,24h后恢复原来形态,并贴壁增殖,形态和原代细胞相似,4.0-5.0d后呈融合状态。两种方法培养的骨髓基质细胞增殖活性差异无显著性意义（P〉0.05）。结论：改良Dexter法及IMDM培养基培养均可使骨髓基质细胞在短期内贴壁及增殖。IMDM培养基由于不需加氢化可的松,故比改良Dexter法更易于操作。