供体特异性体内免疫状态的定量检测

摘要

背景:由于免疫反应的复杂性,目前的免疫学检测方法均有其局限性,虽然各种检测技术精确程度不断提高,但是单一指标不足以判断机体复杂的免疫状态。建立一种在多指标基础上的联合评估模式来监测移植后受体免疫状态是当前需要解决的难题。目的:建立具有供体抗原特异性的体内免疫状态定量检测方法,探索该方法的流式检测技术参数、荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点。方法:取C57及BALB/c小鼠脾脏制备脾细胞单细胞悬液,分别用不同浓度活细胞染料羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色后制备1∶1混合细胞悬液,按混合细胞输注C57→BALB/c小鼠皮肤移植排斥模型,分别于输注后1,2,4,10h,1,2,3,6d应用流式细胞仪检测外周血两种荧光细胞的比例变化,同时设未移植BALB/c小鼠为对照,探索CFSE荧光染色条件、输注细胞数及确定最佳测试时间点,按公式计算供体特异性细胞杀伤率。结果与结论:供体特异性体内免疫状态定量检测方法流式检测设定在淋巴细胞门,两种细胞CFSE的染色浓度差控制在20倍左右,输注细胞总数在一定范围内对结果没有影响,输注细胞后2～4h为最佳检测时间点。提示体内细胞毒性试验是一种简单、准确、稳定的免疫状态体内定量监测方法,可以全面反映小鼠皮肤移植后受体的免疫状态。