程序性细胞死亡因子4是替代活化巨噬细胞的新分子标志物

摘要

背景:程序性细胞死亡因子4的表达水平与经典活化的巨噬细胞的表型负相关,但是程序性细胞死亡因子4的表达水平与巨噬细胞替代活化的关系仍不明确.目的:观察替代活化的巨噬细胞中程序性细胞死亡因子4的表达水平改变,及其对替代活化的影响.方法:用白细胞介素4、地塞米松单独刺激或联合刺激诱导NR 8383细胞的替代活化;采用qPCR检测巨噬细胞替代活化的分子标志物的表达水平,确定诱导巨噬细胞替代活化的最适条件;采用qPCR和Western blot检测替代活化的巨噬细胞模型中程序性细胞死亡因子4表达的改变;分别用大鼠程序性细胞死亡因子4高表达质粒和程序性细胞死亡因子4干扰质粒转染NR 8383细胞株,采用荧光倒置显微镜观察转染的效率,并检测程序性细胞死亡因子4的表达水平;分别检测程序性细胞死亡因子4高表达和程序性细胞死亡因子4敲低后NR 8383细胞株中巨噬细胞经典活化和替代活化的分子标志.结果与结论:①白细胞介素4和地塞米松联合刺激比白细胞介素4或地塞米松单独刺激可更有效的诱导巨噬细胞的替代活化;10 μg/L白细胞介素4+50 nmol/L地塞米松刺激24 h可有效诱导巨噬细胞的替代活化.②在替代活化的巨噬细胞中程序性细胞死亡因子4的表达水平显著升高,是替代活化的分子标志.③程序性细胞死亡因子4高表达上调替代活化的分子标志的表达(P＜0.05);而敲低程序性细胞死亡因子4可下调CD206的表达(P＜0.05),并显著上调经典活化的分子标志诱导型一氧化氮合酶的表达(P＜0.05).结果表明程序性细胞死亡因子4上调是替代活化巨噬细胞的一个重要分子标志物.