过表达白血病抑制因子受体对甲状腺癌干细胞干性维持及体内肺转移能力的影响

摘要

背景：甲状腺癌干细胞是甲状腺癌发生复发转移的关键，白血病抑制因子受体(leukemia inhibitory factor receptor，LIFR)在多种恶性肿瘤中表达下调，且过表达LIFR可抑制恶性肿瘤的复发与转移。目的：探讨LIFR对甲状腺癌干细胞干性维持和体内肺转移能力的影响。方法：收集转移性甲状腺癌患者的肺转移灶，分离培养原代甲状腺癌细胞TCLM，经无血清悬浮培养形成肿瘤细胞球，流式分选筛选出CD133+表型的转移性甲状腺癌干细胞细胞亚群TCLM-S。将包含LIFR的重组慢病毒过表达质粒及其阴性对照空载体质粒分别以病毒/细胞数量=20的比例感染甲状腺癌干细胞TCLM-S，经2.0 mg/L嘌呤霉素筛选，成功构建稳定表达LIFR或阴性对照的TCLM-SLIFR和TCLM-Scontrol细胞株。qRT-PCR检测LIFR在TCLM-SLIFR和TCLM-Scontrol细胞中的表达，流式细胞术检测TCLM-SLIFR和TCLM-Scontrol细胞中CD133+细胞亚群的比例，Western Blot检测TCLM-SLIFR和TCLM-Scontrol细胞中干性相关因子SOX2、Oct4、Nanog及肿瘤侵袭和转移相关蛋白E-cad、MMP-2、MMP-7的表达。将TCLM-SLIFR和TCLM-Scontrol细胞分别经尾静脉注射到BALB/c裸鼠体内，构建甲状腺癌干细胞裸鼠肺转移模型，观察过表达LIFR对裸鼠体内肺转移能力的影响。结果与结论：与TCLM-Scontrol细胞相比，TCLM-SLIFR细胞中LIFR的表达显著增加，流式分选技术检测CD133+干细胞亚群的比例显著降低，干细胞干性相关因子SOX2、Oct4和Nanog的蛋白表达显著降低，肿瘤侵袭和转移相关蛋白E-cad的表达显著增加，MMP-2和MMP-7的表达显著降低，裸鼠体内肺转移的数量显著降低。结果表明，过表达LIFR可显著抑制甲状腺癌干细胞的干性和体内肺转移能力