苯肾上腺素对氧化应激损伤成骨细胞形态和Nampt的影响

摘要

背景:已有研究显示苯肾上腺素对放射性损伤的唾液腺细胞和上皮细胞等均具有保护作用,但其对过氧化氢造成氧化应激损伤的成骨细胞作用尚不清楚。目的:研究苯肾上腺素对过氧化氢造成的成骨细胞氧化应激损伤中烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase,Nampt)的调控作用。方法:原代培养成骨细胞,随机分为空白对照组、单纯H2O2处理组、苯肾上腺素组和苯肾上腺素+H2O2组(1×10-5 mol/L的苯肾上腺素预处理半小时后,300μmol/L过氧化氢作用于成骨细胞)。不同时间点观察细胞,并于24 h时间点收集细胞,提取细胞总RNA和总蛋白,应用半定量RT-PCR和免疫印迹法(Western blotting)检测成骨细胞mRNA调控和蛋白的表达情况。结果与结论:①镜下观察可见单纯H2O2处理组较空白对照组细胞数量减少、形态皱缩明显;苯肾上腺素+H2O2组在处理12,24和48 h后细胞数量较单纯H2O2处理组均明显增多;②RT-PCR结果显示24 h时间点,单纯H2O2处理组较空白对照组Nampt mRNA表达减少31.23%(P<0.05);苯肾上腺素+H2O2组较单纯H2O2处理组Nampt mRNA表达增加206.20%(P<0.05);③Western blotting结果显示24 h时间点,单纯H2O2处理组较空白对照组Nampt蛋白表达减少67.98%(P<0.05);苯肾上腺素+H2O2组较单纯H2O2处理组Nampt蛋白表达增加152.25%(P<0.05);④提示苯肾上腺素可缓解过氧化氢导致的成骨细胞减少和皱缩,使细胞Nampt mRNA和蛋白表达水平上调,Nampt基因可能是苯肾上腺素对成骨细胞氧化应激损伤作用的相关调控基因。