葡萄籽提取物抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡促进胫骨生长

摘要

背景:葡萄籽提取物具有抑制软骨细胞凋亡和衰老、改善骨关节炎作用,但是有关葡萄籽提取物对生长板软骨细胞凋亡及胫骨生长的影响尚不清楚。目的:探讨葡萄籽提取物对白细胞介素1β诱导大鼠生长板软细胞凋亡的作用及对胫骨生长的影响。方法:①细胞实验:体外分离、培养及鉴定SD大鼠生长板软骨细胞,实验分为对照组、模型组、葡萄籽提取物组、miR-138-5p NC组、miR-138-5p inhibitor组。对照组细胞常规培养;模型组细胞以20 ng/mL白细胞介素1β诱导生长板软骨细胞凋亡模型;葡萄籽提取物组加入20 ng/mL白细胞介素1β,同时加入10μmol/L葡萄籽提取物溶液共培养48 h;miR-138-5p NC组细胞转染5 nmol/L miR-138-5p NC 12 h后,其余操作同模型组;miR-138-5p inhibitor组细胞转染5 nmol/L miR-138-5p inhibitor 12 h后,其余操作同模型组。qRT-PCR检测miR-138-5p和caspase-3表达;荧光素酶报告实验分析miR-138-5p和caspase-3靶向关系;CCK-8检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测caspase-3、Bcl-2蛋白表达。②动物实验:实验分为正常对照组、葡萄籽提取物组和miR-138-5p inhibitor组,观察葡萄籽提取物对大鼠胫骨平台骨骺闭合及胫骨生长的影响。结果与结论:①miR-138-5p与caspase-3存在靶向关系。②与对照组相比,模型组细胞增殖能力显著降低,凋亡显著增加(P<0.01),miR-138-5p和Bcl-2表达降低(P<0.01),caspase-3表达增加(P<0.01);与模型组相比,葡萄籽提取物组细胞增殖能力显著增加,凋亡显著降低(P<0.01),miR-138-5p和Bcl-2表达升高(P<0.01),caspase-3表达降低(P<0.01);与葡萄籽提取物组相比,miR-138-5p inhibitor组细胞增殖能力显著降低,凋亡显著增加(P<0.01),miR-138-5p和Bcl-2表达降低(P<0.05或P<0.01),caspase-3表达增加(P<0.05)。③大鼠给予葡萄籽提取物灌胃处理后能够延缓胫骨平台骨骺闭合,促进胫骨生长,而给予miR-138-5p inhibitor干预后能够抑制葡萄籽提取物对大鼠胫骨生长的作用。④结果说明,葡萄籽提取物能够通过调控miR-138-5p/caspase-3通路抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡,改善大鼠胫骨平台骨骺闭合,促进胫骨生长。