白藜芦醇抑制大鼠生长板软骨细胞凋亡及对胫骨生长的影响

摘要

目的探索白藜芦醇对IL-1β诱导的生长板软骨细胞凋亡的影响,以及筛选白藜芦醇作用的最适浓度,并对白藜芦醇延迟大鼠骨骺闭合、促进长骨生长的作用进行验证。方法取4周龄SD大鼠,对其生长板软骨细胞进行分离及培养,Ⅱ型胶原免疫荧光实验进行细胞鉴定。将软骨细胞随机分为9组:正常对照组(普通培养基)、模型对照组(含20 ng/mL IL-1β)、阳性对照组(含20 ng/mL IL-1β+5μmol/L来曲唑)、二甲基亚砜(DMSO)对照组(培养基里加入白藜芦醇的溶解物DMSO)、实验1组(只加入40μmol/L白藜芦醇)、实验2组至实验5组(分别含20 ng/mL IL-1β+10、20、40、60μmol/L白藜芦醇)。MTT比色法筛选白藜芦醇抑制生长板软骨细胞凋亡、促进细胞增殖的最适浓度,流式细胞仪检测最适浓度的白藜芦醇抑制软骨细胞凋亡情况;并用适量浓度的白藜芦醇给予大鼠灌胃,观察其对大鼠胫骨平台骨骺闭合及胫骨生长的影响。结果实验分离培养获得大鼠生长板软骨细胞。MTT法检测结果显示,与正常对照组比较,模型对照组细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。与模型对照组比较,来曲唑和不同浓度白藜芦醇均能拮抗IL-1β引起的细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.01),白藜芦醇的干预效果优于来曲唑,且最佳浓度为40μmol/L。流式分析结果显示,模型对照组细胞凋亡率显著高于正常对照组(P<0.05),40μmol/L的白藜芦醇能够降低IL-1β诱导的大鼠生长板软骨细胞的凋亡比例,且干预效果优于阳性对照组来曲唑。100 mg/kg给予大鼠灌胃白藜芦醇可以延迟大鼠胫骨平台骨骺闭合且促进胫骨生长。结论40μmol/L白藜芦醇能明显抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,而100 mg/kg白藜芦醇给予大鼠灌胃可以延迟大鼠胫骨平台的骨骺闭合,为骨骼生长争取更长时间从而促进发育期骨骼增长。