脑胶质瘤Th1/Th2类细胞因子的漂移及意义

摘要

@@ 我们采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法，检测了4株脑胶质瘤细胞株、52例新鲜脑胶质瘤标本和15例脑胶质瘤患者外周血标本的Th1/Th2类细胞因子的表达情况，初步探讨了脑胶质瘤Th2类细胞因子漂移的意义。rn 1．材料与方法：胶质瘤细胞株rnSHG-44、U251、C6和9L，购自上海细胞生物研究所或本室保存。胶质瘤组织标本52例，取自我院患者，术前均未接受放疗、化疗或免疫治疗。术后病理：星形细胞瘤Ⅰ级4例，星形细胞瘤Ⅱ级6例，间变性星形细胞瘤23例，多形性胶质母细胞瘤9例，少突胶质细胞瘤3例，脉络丛乳头状瘤1例，室管膜瘤2例，髓母细胞瘤4例。胶质瘤患者外周血标本15例，取自术前静脉血。细胞传代收获1×106个细胞；胶质瘤组织约1 cm3大小，仔细去除坏死组织；外周血5～10 ml，肝素抗凝，Ficoll梯度离心法分离出单个核细胞；总RNA的提取采用异硫氰酸胍一步法［1］。（1）检测指标：以IFN-γ、IL-2代表Th1类因子，IL-4、IL-6、IL-10、IL-13代表Th2类细胞因子，β-actin为内参照。（2）逆转录反应：5～10 μg细胞总RNA，加入0.1 mol/L DTT 2 μl、4×dNTP 1 μl、M-MLV 1 μl (200 U)、下游引物P2 1 μl(50 pmol/L)，总体积20 μl。37℃ 1 h后，95℃ 10 min灭活M-MLV。（3）PCR反应：继续加入25 mmol/L MgCl2 8 μl、4×dNTP 1 μl、上游引物P1 1 μl,总体积98 μl；95 ℃ 5 min后，加入Taq DNA聚合酶2 μl (1 U/μl) 。循环条件为94 ℃ 1 min，58℃ 1 min，72℃ 1 min，循环35次，最后72℃延长7 min。（4）1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR结果。