压力状态下粪肠球菌培养上清液诱导人牙周膜细胞炎症反应的研究

摘要

目的探讨粪肠球菌培养上清液诱导人牙周膜细胞（human periodontal ligament cell,hPDLC）的炎症反应及其在压力状态下的表达变化。方法噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测不同体积分数[0%（对照组）、1%、2%、5%、10%和20%]的粪肠球菌上清液对hPDLC增殖活性的影响,采用流式细胞术检测粪肠球菌上清液刺激24 h后hPDLC表面Toll样受体2（Toll-like receptor 2,TLR-2）表达的改变;依据MTT及流式细胞术结果,将hPDLC分为不含粪肠球菌上清液的非诱导组与含5%粪肠球菌上清液的诱导组,每组均分别加载0、49及196 Pa的静压力,非诱导组和诱导组均以未加力（0 Pa）状态为对照。24 h 后观察hPDLC的形态变化,通过反转录PCR（reverse transcription-PCR,RT-PCR）和酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测hPDLC肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）及白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的mRNA和蛋白表达水平。结果 MTT法结果显示,培养48 h时,与对照组相比体积分数≥5%的粪肠球菌上清液能显著降低hPDLC的增殖活性（P＆0.05）。流式细胞术结果显示,粪肠球菌上清液刺激hPDLC 24 h后其表面TLR-2阳性细胞率随上清液体积分数的增加而增加,0%、1%、2%、5%、10%和20%体积分数的上清液TLR-2阳性细胞率分别为（2.12±0.07）%、（2.41±0.32）%、（2.65±0.27）%、（4.76±0.46）%、（9.91±0.92）%、（12.01±1.35）%,体积分数≥5%时与对照组相比差异均有统计学意义（P＆0.05）。RT-PCR结果显示,非诱导组施加49 Pa压力时,hPDLC IL-1β和TNF-α mRNA表达与对照组相比差异均无统计学意义（P＆0.05）,施加196 Pa压力时,hPDLC IL-1β和TNF-α mRNA表达与对照组相比差异均有统计学意义（P＆0.05）;而诱导组施加49和196 Pa压力时,hPDLC IL-1β和TNF-α mRNA表达均显著升高,与对照组相比差异均有统计学意义（P＆0.05）。ELISA结果与PCR结果趋势一致。结论高浓度的粪肠球菌上清液能抑制hPDLC的增殖活性;粪肠球菌上清液可以促进hPDLC表面TLR-2的表达;过度的机械压力可引起hPDLC细胞的炎症反应,导致hPDLC对压力不耐受,引起炎症反应加重。