吸烟个体血清对牙龈卟啉单胞菌内化KB细胞及KB细胞产生基质金属蛋白酶1、9和金属蛋白酶组织抑制剂1的影响

摘要

目的探讨慢性牙周炎患者中吸烟个体血清在牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis Pg）内化KB细胞及在内化过程中对KB细胞分泌基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）1、MMP-9及金属蛋白酶组织抑制剂1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）的作用。方法抽取20例（吸烟个体10例,非吸烟个体10例）就诊于中国医科大学口腔医学院牙周科的慢性牙周炎患者前臂静脉血5 ml,离心提取血清。在试验组（吸烟组）和对照组（非吸烟组）中分别加入吸烟个体和非吸烟个体血清200、400及800μl至Pg感染KB细胞模型,作用12 h,脑心浸液琼脂培养基培养细菌5~7 d,计数细菌菌落。采用人酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）试剂盒检测两组上清液中MMP-1、MMP-9及TIMP-1的浓度差异。采用单因素方差分析比较两组中分别加入不同体积（200、400、800μl）血清对Pg内化KB细胞的影响及KB细胞分泌MMP-1、MMP-9、TIMP-1的差异;采用t检验比较吸烟组与非吸烟组加入相同血清量Pg内化KB细胞及KB细胞分泌MMP-1、MMP-9、TIMP-1的浓度差异。结果加入200、400、800μl血清时,吸烟组血清与非吸烟组血清引起Pg内化KB细胞的菌落数分别为（11.2±1.1）×10~4、（12.6±1.2）×10~4、（44.7±1.3）×10~4CFU/ml和（33.6±1.4）×10~4、（38.9±1.1）×10~4、（11.2±1.2）×10~4CFU/ml（P＜0.05）。在加入200、400、800μ1吸烟个体血清时,KB细胞分泌MMP-1的质量浓度分别为（107.2±21.5）、（165.9±20.2）及（434.4±48.0）μg/L,分泌MMP-9的质量浓度分别为（3.99±0.29）、（4.21-0.61）及（5.62±0.47）μg/L,分泌TIMP-1的质量浓度分别为（401.3±12.7）、（418.3±28.5）及（637.3±37.3）μg/L;加入200、400、800μl非吸烟个体血清时,KB细胞分泌MMP-1的质量浓度分别为（77.6±10.8）、（84.7±10.2）及（98.2±9.7）μg/L,分泌MMP-9的质量浓度分别为（3.84±0.52）、（4.02±0.68）及（4.25±0.37）μg/L,分泌TIMP-1的质量浓度分别为（67.3±26.9）、（89.4±22.7）及（78.2±16.5）μg/L。随着吸烟组血清剂量的增加,KB细胞表达MMP-1、MMP-9、TIMP-1的质量浓度增加,不同体积血清引起MMP-1、MMP-9及TIMP-1表达的差异具有统计学意义（P＜0.05）;加入800μ1吸烟组血清与加入800μl非吸烟组血清相比,KB细胞分泌MMP-1、MMP-9及TIMP-1的质量浓度均显著升高（P＜0.05）。结论吸烟个体的血清可能在Pg内化KB细胞的过程中发挥作用,并促进KB细胞产生MMP-1、MMP-9及TIMP-1;吸烟个体的口腔局部微环境可能有利于慢性牙周炎的进展及复发。