神经生长因子对小鼠颌骨骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

摘要

目的:研究不同浓度神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对外胚层来源的颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow mesenchymal stem cells,JBMMSCs)增殖及成骨分化的影响。方法:原代培养小鼠JBMMSCs并鉴定。然后分四组分别加入含0 ng/ml、10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml NGF培养液至第二代JBMMSCs中孵育3天,采用CCK-8检测JBMMSCs增殖,碱性磷酸酶试剂盒、qRT-PCR检测ALP、OCN、BMP2、RUNX2等重要成骨及增殖标记物Ki67、MCM-2的表达,Western blot检测OPN、RUNX2以及Ki67、MCM-2的表达。结果:采用骨片贴壁法原代培养的小鼠JBMMSCs经流式细胞术鉴定,表明成功获取JBMMSCs。CCK-8显示3种浓度的NGF均能促进JBMMSCs增殖,且呈浓度依赖性特点。qRT-PCR结果显示:ALP、OPN、RUNX2、BMP2、Ki67、MCM-2表达水平随浓度的升高而增加,但Ki67、MCM-2表达量在100 ng/ml NGF时下降。Western blot结果显示,OPN、Ki67、MCM-2蛋白表达随着NGF浓度的升高而增加,而RUNX2的蛋白表达则在100 ng/ml NGF时呈现下降趋势。结论:一定浓度的NGF可促进JBMMSCs增殖及成骨分化,50 ng/ml为NGF作用的最佳浓度。