特异沉默人核糖核苷酸还原酶M2基因对人骨肉瘤细胞生物学特性的影响

摘要

目的探讨小干扰RNA（siRNA）沉默核糖核苷酸还原酶M2（RRM2）基因表达对人骨肉瘤细胞Saos-2生物学影响及分子机制。方法利用小干扰RNA技术,观察沉默Saos-2细胞中RRM2基因的表达,用实时荧光定量PCR（Real time-PCR）及Western blot技术检测人骨肉瘤细胞Saos-2和人正常成骨细胞hFOB1.19的mRNA及蛋白的表达;用CCK-8方法检测si-RRM2对Saos-2细胞增殖的影响;用Transwell细胞迁移系统检测si-RRM2对Saos-2细胞迁移能力的影响;用酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测Saos-2细胞凋亡;采用Western blot技术检测细胞周期调控因子细胞周期素D1（Cyclin D1）和抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bel-2）蛋白水平变化。结果 Saos-2细胞RRM2 mRNA和蛋白比hFOB1.19细胞高表达;用si-RRM2转染Saos-2细胞后,Real time-PCR结果证实能时间及剂量依赖性下调RRM2基因表达;CCK-8方法结果显示下调RRM2基因会时间及剂量依赖性抑制Saos-2增殖,而人正常成骨细胞增殖抑制没有显著变化;Transwell细胞迁移系统检测显示下调RRM2基因后,显著抑制了Saos-2的迁移能力;si-RRM2联合化疗药物阿霉素促进Saos-2细胞凋亡;Western blot结果显示沉默RRM2后细胞周期调控因子Cyclin D1和抗凋亡蛋白Bcl-2均下调。结论 RRM2的过表达与人骨肉瘤细胞Saos-2的高增殖和迁移能力有关,抑制RRM2的功能是治疗人骨肉瘤的一个潜在的治疗策略。