结核分枝杆菌转录调控蛋白Rv0324调控rv3597c的初步研究

摘要

结核分枝杆菌(MTB)利用其转录调控系统快速适应环境变化,而其ArsR家族的转录调控蛋白Rv0324则在转录调控系统中发挥着重要的作用.为研究Rv0324的调控机制,本研究以卡介苗(BCG)(Tokyo-172)基因组为模板,PCR扩增得到rv0324基因,构建pET22b-rv0324重组表达载体,转化至E.coli BL21后经诱导表达获得蛋白Rv0324;同时以BCG(Tokyo-172)基因组为模板扩增获得rv3597c启动子(p/o rv3597c).通过体外凝胶迁移实验(EMSA)和体内染色质免疫沉淀(ChIP)实验对Rv0324与p/o rv3597c的相互作用进行检测,结果显示Rv0324可与p/o rv3597c结合,且Rv0324结合于p/o rv3597c的大沟;通过EMSA对影响Rv0324和p/o rv3597c结合的小分子进行筛选,结果显示二者的结合均能够被Trp、Fe3+、Cu2+、VB1、VC和贝达喹啉小分子抑制.在利用trRosetta软件对Rv0324蛋白结构分析的基础上,通过Rv0324和小分子的对接实验进一步分析它们间可能的互作模式,结果显示主要是位于Rv0324环区结构域的Asp203和Asp204氨基酸残基参与了与小分子的互作.综上所述,本研究首次证实MTB Rv0324通过直接调控rv3597c的表达,参与调控MTB的氧耗和代谢水平的变化,同时发现了影响Rv0324和rv3597c互作的小分子及其作用模式,为临床治疗的药物筛选提供了一定的参考依据.