表达IBDV鸡源中和抗体的重组NDV的构建及免疫效果的探究

摘要

为研制预防新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)两种病毒病的疫苗,本研究通过基因工程抗体和病毒反向遗传操作技术,以NDV LaSota株为载体,在病毒基因组的不同部位,分别或同时插入具有中和活性的鸡源IBDV抗体重链(H)或轻链(L)片段,构建并拯救出重组病毒,分别命名为rNDV-IRES-H-L(P/M)、rNDV-H (NP/P)-L (P/M)、rNDV-L (NP/P)-H (P/M)、rNDV-H (P/M)、rNDV-H (NP/P),并对其进行HA、TCID50、EID50、MDT、ICPI等试验以检测上述重组病毒的生物活性.结果 显示,重组病毒不仅保持了其亲本病毒(NDVLaSota株)的感染能力而且还保持了其弱毒株的生物学特性.生长曲线结果显示,重组病毒与亲本NDV生长特性基本一致,表明外源基因的插入对病毒的复制能力无影响.ELISA和western blot结果显示rNDV-H (NP/P)、rNDV-H (P/M)中的H基因,rNDV-IRES-H-L(P/M)、rNDV-H (NP/P)-L (P/M)、rNDV-L (NP/P)-H (P/M)中的H和L基因均获得了表达,且rNDV-H (P/M)中的H基因和rNDV-L(NP/P)-H (P/M)中的H和L基因表达量高.用表达量高的重组病毒接种14日龄SPF鸡,分别检测其诱导SPF鸡NDV和IBDV抗体的产生情况.结果 显示,在NDV抗体水平方面:HI实验结果表明重组病毒抗体效价均能在14d达到保护临界值(4log2);在IBDV抗体水平方面:ELISA结果表明重组病毒均能产生IBDV抗体.利用上述表达量高的重组病毒对人工感染IBDV(经典株BC6/85)的SPF鸡进行免疫保护试验,结果表明rNDV-H (P/M)的免疫保护效果要好于卵黄抗体和rNDV-L (NP/P)-H (P/M).本研究获得了表达IBDV抗体的重组NDV即rNDV-H (P/M),为利用NDV载体表达本动物源抗体提供了实验依据.