摘要:
目的:氟苯尼考(FF)在兽医临床上的广泛使用而引起的药物残留和细菌抗性的产生对人们的健康带来了很大威胁,需要对其药物残留进行检测.氟苯尼考胺(FFA)是其主要代谢产物,同时FF的大多数代谢产物经酸水解都可转化成FFA,可通过对FFA的检测达到检测食品中FF残留的目的.卵黄抗体(IgY)因其具有产量高、易于获得、理化性质稳定、成本低廉、抗体表达时间长且平稳又符合动物福利原则等优势,越来越受到重视.本研究为探索IgY抗体在半抗原残留免疫学检测中的应用潜力,并建立食品中FF残留的检测方法,建立了基于IgY的FF的ELISA检测方法.方法:采用戊二醛法合成人工抗原FFA-BSA与BSA-OVA,并通过紫外分光光度法和非变性凝胶电泳综合鉴定.FFA-BSA免疫产蛋鸡收集鸡蛋,采用聚乙二醇-6000(PEG6000)沉淀法提取IgY抗体,并用SDS-PAGE测定其纯度,间接ELISA监测抗体效价动态变化,利用此抗体建立了快速检测FFA的间接竞争ELISA(icELISA)检测方法,并通过与FF、氯霉素(CAP)、甲砜霉素(TAP)的交叉反应率研究,对IgY的特异性进行了评价.结果:表明两种鉴定方法都证明FFA人工抗原合成成功,免疫后,随着时间的推移,抗体效价逐渐上升,至三免后达到最高峰,效价为1∶128000,停止加强免疫后抗体效价在较高水平仍持续3个月左右.PEG-6000法提取的IgY纯度较高.icELISA检测方法的标准曲线线性关系良好,相关回归方程为y=-13.71x+64.95(R2=0.945),IC50为12.30ng/mL,与FFA类似物FF、CAP和TAP的交叉反应率低于2%,证明IgY特异性良好.结论:表明该研究所建立的icELISA检测方法的特异性较高,线性关系良好,能够满足对FF残留检测的要求,有进一步发展成ELISA试剂盒的潜力,为动物性食品中FF药物残留检测方法的建立奠定了基础;IgY抗体在半抗原检测及食品安全中具有巨大的应用潜力.