猪传染性胃肠炎华毒弱毒株纤突蛋白B、C抗原位点片段基因的克隆与序列分析

摘要

猪传染性胃肠炎华毒（TGEV H）是我国分离的代表毒株，H弱毒株是我国自行培育成功的具有良好免疫原性的疫苗株。应用RT－PCR方法扩增出1．3kb的目的片段，包括S基因的编码的B、C两个主要抗原位点的片段，目的片段与pUC19质粒载体进行连续，转化，鉴定后得到阳性重组质粒，命名为pTS1，将重组质粒插入的目的基因片段进行序列分析和比较，其结果表明TGEV H株和S基因5’端B、C位点片段1190bp的核苷酸序列与国外的TGEV毒株Miller、Purdue-115、FS772／70及台湾省TFI毒株序列均具有很高的同源性，达94．72以上。推导的氨基酸序列同源性为94．70％以上。编码抗原位点C的序列与其它毒株完全一致，但在B位点发生改变，即第97个氨基酸发生改变，由Trp突变为Ser。该核苷酸该片段全长1261bp，包括起始密码子ATG及基因间的共同序列ACTAAAC。本研究首次报道了国内的TGEV分离株－H弱毒株S基因的RT－PCR扩增及其编码的B、C抗原位点片段的分子克隆及序列分析，为进一步揭示TGEV强弱毒差别的分子机制、开展新型疫苗及进行分子诊断的研究奠定了重要基础。