马巴贝西虫EMA-1基因的克隆与表达

摘要

通过聚合酶链式反应扩增出体外培养的马巴西虫USDA株基因EMA-1,将该片段连接到克隆质粒载体pUC19的Bam HI酶切位点上,并对其序列进行测定.结果表明该基因长度为836bp,编码的表面蛋白由272个氨基酸残基组成,与佛罗里达(Florida)株的EMA-1的氨基酸序列有95%左右的同源性.再将EMA-1基因片段插入到表达质粒载体pGE-MEX-2的BamHI位点上,并导入大肠杆菌JM109(DE3)中.经SDSPAGE分析和Western blot检测的结果表明,马巴贝西虫USDA株基因EMA-1,在大肠杆菌内获得表达,融合蛋白的分子量为65kDa.将其免疫给小鼠可产生特异性的抗马巴贝西虫抗体,且同驽巴贝西虫无交叉反应.