实时荧光定量TaqMan-PCR检测鸭瘟病毒方法的建立

摘要

根据GenBank中鸭瘟病毒UL6和UL7基因的序列,设计了一对特异性引物及TaqMan探针,扩增位于UL6和UL7基因第891～991位长度为101 bp片段.以DPV标准强株DNA为模板,建立了实时荧光定量PCR检测鸭瘟病毒的方法.该方法只能在鸭瘟病毒DNA样本中检出荧光信号,最小检出量为1.57× 102copies(23.7 fg);线性范围达8个数量级;平行复管检测,组内变异系数为0.84%(n=20),同一组样本(n=6)间隔30 d重复检测,结果无显著性差异;对试验感染鸭肝脏和脑组织中鸭瘟病毒的检出率为100%(40/40),对临床病例的检测结果与病毒分离鉴定结果一致;从核酸提取到报告检测结果仅需3 h;对鸭正常组织、鸡传染性喉气管炎病毒、鸭病毒性肝炎病毒、鸡源大肠杆菌、鸭源多杀性巴氏杆菌、鸭副伤寒沙门氏菌等非鸭瘟病毒DNA检测,不出现非特异性荧光信号.