李氏杆菌溶血素基因的表达及活性分析

摘要

根据LMO溶血素基因hlyA设计引物,PCR扩增hlyA,将扩增产物与pMD18-T连接,重组质粒经酶切鉴定、PCR分析以及确证性测序.将由重组质粒pMD18-hlyA上扩增的缺失信号肽序列的目的片段与表达载体pGEX-4T-1分别酶切连接后,转化BL21细胞.筛选阳性克隆,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析,纯化重组融合蛋白进行溶血试验、小鼠致病力试验和间接ELISA分析.结果表明hlyA基因在大肠杆菌中成功表达分子量82 Ku的融合蛋白,能裂解红细胞,且能被LMO阳性血清所识别.一定剂量腹腔注射能将小鼠致死.以此为包被抗原的间接ELISA可以将LMO阴、阳性血清分开.这表明GST-LLO融合蛋白具有良好的生物活性,可用于李氏杆菌病的间接ELISA诊断.