口蹄疫病毒vp1基因的克隆与植物双元表达载体的构建

摘要

通过RT-PCR法获得阿克苏(Akesu/O/58)FMDV结构蛋白基因vp1,将该基因克隆到pGEM-T Easy载体进行核苷酸序列测定.将vp1基因、Kozak序列等插入中间表达质粒pBin438,构建重组中间表达载体pBinVP1.采用三亲融合法构建植物双元表达载体pBinFMDV-VP1.结果表明:vp1基因为639 bp.重组中间表达载体pBinVP1经BamH I/Sal I双酶切、PCR扩增和序列测定,表明vp1基因、Kozak序列等插入pBinVP1中.在含50 mg/L卡那霉素、25 mg/m链霉素和50 mg/L利福平的YEB培养基上筛选及对融合农杆菌质粒进行vp1基因的PCR检测,证明植物双元表达载体pBinFMDV-VP1构建正确.