仙台病毒F基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达及抗原性分析

摘要

为真核表达仙台病毒(SeV)融合蛋白(F)基因,本研究根据GenBank登录的SeV F基因序列设计合成一对特异性引物,以pMD18-T-F阳性重组质粒为模板扩增F基因,并将其克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac HTa中,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受态细胞DH10Bac,提取重组杆粒rBacmid-F,经PCR鉴定正确将rBacmid-F转染Sf9细胞,连续传代后,细胞病变明显.经SDS-PAGE分析,成功表达了相对分子量为65 ku左右的F蛋白,western blot和ELISA分析表明重组F蛋白具有良好的抗原性.