鸭源呼肠孤病毒Sigma A蛋白的原核表达及免疫活性检测

摘要

为制备新型鸭源呼肠孤病毒(DRV) THIl株Sigma A蛋白的多克隆抗体,本研究采用RT-PCR方法扩增DRV TH11株Sigma A的编码基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21 (DE3)中进行诱导表达.采用SDS-PAGE和western blot对表达产物进行鉴定.结果表明,Sigma A基因不仅可以在大肠杆菌中高水平表达,表达产物的分子量约66 ku,而且表达产物能够被特异性DRV多克隆抗体识别,证明表达的Sigma A蛋白具有良好的免疫活性.以纯化的Sigma A蛋白免疫实验兔制备抗Sigma A蛋白的多克隆抗体,间接ELISA检测结果显示其效价达1:20000以上.间接免疫荧光试验表明,多克隆抗体能够特异性识别DRV的Sigma A蛋白,表明Sigma A蛋白具有良好的免疫原性.本研究为进一步研究Sigma A蛋白的功能,以及建立DRV检测方法奠定了基础.