胸膜肺炎放线杆菌自转运粘附素Apa1/Apa2基因敲除菌株的构建及其生物学特性研究

摘要

为研究三聚体自转运粘附素(TAAs)对胸膜肺炎放线杆菌(APP)生物学特性的影响,本研究利用自杀性载体系统,通过正负向筛选标记的同源重组方法筛选APP血清5b型L20菌株的TAAs基因Apa1及Apa2的双基因敲除菌株,命名为△Apa1/△Apa2菌株,以野生菌株为对照,比较△Apa1/△Apa2菌株在体外的生物学特性变化,以小鼠为动物模型检测TAAs基因缺失对细菌毒力的影响.体外试验表明,△Apa1/△Apa2菌株在BHI液体培养基中生长速率与野生菌株无明显差异;电镜下观察△Apa1/△Apa2菌株菌体表面粗糙,有絮状物沉积;自凝、被膜形成能力下降;对RAW264.7细胞的粘附效率低于野生菌株.小鼠体内试验表明TAAs基因的缺失导致细菌毒力降低,在肺部和脾脏的定殖菌量明显低于野生菌株,然而两者的病理学差异不显著.本研究表明TAAs影响APP的形态、自凝、被膜形成等特性,并在APP粘附细胞以及对小鼠致病性方面发挥重要作用,为进一步研究TAAs在APP感染机制中的作用奠定了基础.