猪伪狂犬病病毒HeN1株gE蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

摘要

为制备抗猪伪狂犬病病毒(PRV)糖蛋白E(gE)的单克隆抗体(MAb)并鉴定其抗原表位,本研究以原核系统表达PRV HeN1株截短的gE (aa127～aa232)蛋白(rgE),并对表达的rgE进行纯化免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,以该病毒感染的Vero E6细胞及真核表达的gE蛋白为检测抗原,采用IFA检测方法筛选杂交瘤细胞系,获得一株稳定分泌抗PRV gE的MAb杂交瘤细胞系(mgE185).该MAb亚型鉴定为IgG1型,轻链为K链.该MAb不具有中和病毒的活性,其细胞培养上清及腹水IFA效价分别为1:80和1:2 560.Western blot试验显示mgE 185可以特异性识别gE蛋白,表明其针对的抗原表位为线性表位.通过截短表达gE蛋白鉴定该MAb的抗原识别序列为151IGDYL155,该抗原表位在PRV中高度保守.本研究制备的MAb为进一步建立特异性强、灵敏度高的PRV gE-ELISA检测方法奠定了基础.