日本血吸虫DNA疫苗的构建及其保护性免疫

摘要

目的制备日本血吸虫裸露DNA疫苗(pBK-Sj14-3-3),观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用.方法以RT-PCR方法扩增Sj14-3-3基因,并将其亚克隆入真核表达载体pBK;提取、纯化重组质粒pBK-Sj14-3-3,肌肉注射法接种BALB/c小鼠;日本血吸虫尾蚴攻击感染后,剖杀小鼠,计算减虫率和减卵率,观察pBK-Sj14-3-3对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的影响.结果 1%琼脂糖凝胶电泳显示,RT-PCR扩增产物与EcoRⅠ+XhoⅠ双酶切重组质粒得到的插入片段大小相同,约为765 bp,核苷酸序列测定证实插入片段为Sj14-3-3;免疫注射pBK-Sj14-3-3后,14-3-3组平均每只小鼠获检成虫数为22.9±9.6,与对照组成虫数(31.3±7.3)比较,14-3-3组小鼠平均成虫负荷下降了27%.经5%氢氧化钾消化后,14-3-3组平均每克肝组织虫卵数为16 600±5 904,每对成虫平均虫卵数为4 769±1 156,与对照组平均每克肝组织虫卵数(77 875±4 326)和每对成虫平均虫卵数(9 723±2 074)比较,减卵率为79%,每对成虫减卵率为51%.肝脏虫卵肉芽肿平均直径下降了29%.结论 DNA疫苗pBK-Sj14-3-3构建成功,且在小鼠抗血吸虫感染中有一定的免疫保护作用,是日本血吸虫病潜在的疫苗候选分子.