双（对氯苯基）二氯乙烯与β-六氯化苯对大鼠睾丸支持细胞凋亡的影响

摘要

目的探讨双（对氯苯基）二氯乙烯[1,1-dichloro-2,2-bis（p-chlorophenyl）ethylene,P,p′-DDE]、β-六氯化苯（β-benzenehexachloride,β-BHC）及其联合作用对大鼠睾丸支持细胞凋亡半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）途径的影响及其作用机制。方法以不同浓度的P,p′-DDE、β-BHC（分别为10、30、50 μmoL/L）及其联合（10 μmol/L P,p′-DDE+10 μmol/L β-BHC,30 μmol/L P,P′-DDE+30 μmol/L β-BHC,50 μmol/L P,p′-DDE+50 μmol/L β-BHC）处理大鼠睾丸支持细胞24 h,设Caspase-3抑制剂组（先用100 μmol/L Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO处理支持细胞2 h,再用50 μmol/L P,p′-DDE+50 μmol/L β-BHC联合处理）,采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定支持细胞的活性,吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双重荧光染色测定支持细胞的凋亡率,RT-PCR法检测Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9 mRNA表达量的变化。结果 10、30、50、70μmol/L P,p′-DDE组吸光度（A值）分别为0.498±0.039、0.481±0.065、0.397±0.032和0.286±0.049,相同浓度β-BHC组A值分别为0.518±0.103、0.490±0.060、0.454±0.054和0.302±0.030,10、30、50 μmol/L P,p′-DDE与β-BHC联合组A值分别为0.483±0.048、0.473±0.058和0.337±0.052,50 μmol/L浓度组与对照组比较,A值降低,差异有统计学意义（t值分别为4.599、2.716、6.537,P＜0.05）。AO/EB双重荧光染色分析结果显示,10、30、50 μmoL/L各染毒组的支持细胞凋亡率明显升高,与溶剂对照组（9.83±0.95）%、Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO组（15.60±2.74）%比较,P,p′-DDE处理组分别为（23.73±2.24）%、（30.03±2.84）%和（38.04±4.98）%,β-BHC处理组分别为（24.42±3.53）%、（30.64±1.06）%和（39.88±0.17）%,联合处理组分别为（37.08±1.71）%、（42.18±3.32）%和（41.25±3.36）%。逆转录（RT）-PCR结果表明,Caspase-3、Caspase-8及Caspase-9 mRNA表达量随着P,P′-DDE、β-BHC及其联合浓度的增加而增加。结论 P,P′DDE、β-BHC及其联合作用可通过激活启动Caspase-8和Caspase-9,进而激活下游效应Caspase-3引起支持细胞凋亡。