复方血栓通胶囊对叔丁基过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞氧化损伤保护作用

摘要

目的探讨复方血栓通胶囊对叔丁基过氧化氢（t-BHP）诱导体外培养的人视网膜色素上皮细胞（hRPE）氧化损伤的保护作用。方法原代培养hRPE细胞后取第3～5代进行实验。应用MTT法筛选复方血栓通的最佳药物浓度;再分别用MTT及Annexin V/PI双染法检测复方血栓通及其各单方药物对细胞氧化损伤的保护作用。hRPE细胞分为正常对照组、t-BHP模型组和t-BHP+复方血栓通（0.25mg/ml）组,倒置相差显微镜和Hoechst33258染色观察各组细胞的形态和细胞核;MitoSOX染色检测活细胞线粒体中ROS的产生;JC-1染色检测线粒体膜电位的变化;ELISA法检测细胞分泌的VEGF浓度。结果 500μmol-BHP干预6h后,模型组细胞存活率下降到（49.9±6.3）%,而不同浓度的复方血栓通组细胞存活率均较模型组升高,且以0.25mg/ml的保护作用最佳;细胞存活率、凋亡及坏死率的结果显示复方血栓通较各单方药物的保护作用更为明显;模型组多数细胞肿胀、变圆、漂浮和核固缩,复方血栓通组损伤的细胞明显减少,线粒体内ROS的产生、线粒体膜电位的下降、分泌的VEGF均较模型组明显减少。结论复方血栓通胶囊对t-BHP诱导hRPE细胞的氧化损伤具有保护作用,且其保护作用较各单方药物更为明显,其作用机制为清除ROS,阻止线粒体膜电位的下降,抑制VEGF的分泌,从而抑制细胞凋亡和坏死,提高细胞存活率。