金钗石斛总生物碱抗慢性应激诱导的大鼠焦虑作用及机制

摘要

目的通过慢性应激诱导大鼠焦虑模型,观察金钗石斛总生物碱(DNLA)的抗焦虑作用并探索其可能的作用机制。方法将24只雄性SD大鼠随机分为3组:空白对照组(C)、焦虑模型组(M)和模型给药组(M+DNLA),每组8只。采用慢性应激的方法诱导大鼠焦虑模型。M+DNLA组每天灌胃给予DNLA 20 mg·kg-1,C组和M组灌胃等体积的1%吐温80溶剂,连续给药28 d。高架十字迷宫实验(EPM)和旷场实验(OFT)检测大鼠焦虑行为。行为学实验结束后,麻醉,微透析,取材。尼氏染色法观察皮质、海马CA2区神经元和尼氏小体情况;高效液相色谱电化学技术检测前额叶皮层透析液、皮质组织、血清中5-羟色胺(5-HT)及其代谢产物5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)含量;ELISA法检测皮层色氨酸羟化酶(TPH)、单胺氧化酶(MAO)活性及皮质酮(CORT)和促肾上腺皮质激素(ACTH)含量;免疫组化法检测5-HT系统相关蛋白:突触囊泡单胺转运体(SLC18A1)、突触相关蛋白-25(SNAP25)、5-HT 1A受体(5-HT1AR)和5-HT转运体(SERT)的表达;HPA轴相关蛋白:促肾上腺皮质激素释放因子1受体(CRF1)、肾上腺皮质激素受体(ACTHR)和糖皮质激素受体(GR)的表达;γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)和N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR1)蛋白的表达。结果与C组比较,M组大鼠在EPM开放臂活动距离、进入次数明显下降,OFT中央区域活动距离、运动总路程显著下降;皮质和海马CA2区神经元及尼氏小体数量明显减少;前额叶透析液、皮质和外周血清中5-HT和5-HIAA含量明显增加;TPH和MAO活性显著升高,CORT和ACTH含量显著升高;SLC18A1,SNAP25,5-HT1AR,GR和GABAAR蛋白表达明显降低;SERT,CRF1,ACTHR和NMDAR1蛋白表达明显增加。与M组比较,DNLA给药组EPM开放臂活动距离、进入次数明显增加,OFT中央区域距离、活动总路程显著上升;皮质和海马CA2区神经元及尼氏小体数量显著增加;前额叶透析液、皮质组织和血清中5-HT和5-HIAA含量明显降低;TPH和MAO活性,CORT和ACTH含量显著降低;SLC18A1,SNAP25,5-HT1AR,GR和GABAAR蛋白表达明显增加;SERT,CRF1,ACTHR和NMDAR1蛋白表达明显降低。结论 DNLA对慢性应激诱导的大鼠焦虑行为具有改善作用,其作用机制与调节5-HT系统,抑制HPA轴亢进以及调节GABAAR和NMDAR1蛋白表达有关。