偶氮鎓二醇盐衍生物JS-K通过MEK/ERK通路抑制肝纤维化抗大鼠肝癌

摘要

目的 探讨偶氮鎓二醇盐衍生物O2(2,4-二硝基苯基)1-〔(4-乙氧羰基)哌嗪-1-yl〕偶氮-1-鎓-1,2-二醇(JS-K)对大鼠原发性肝癌的影响.方法 Wistar雄性大鼠40只,随机分为正常对照组(ip,生理盐水10 mL·kg-1,连续16周)、模型组〔ip,二乙基亚硝胺(DEN)50 mg·kg-1,前4周每周2次,4周后每周1次,连续16周〕、JS-K 0.25和0.50 mg·kg-1组〔(ip,DEN 50 mg·kg-1)+(尾静脉注射,JS-K 0.25或0.50 mg·kg-1),每周2次,在DEN注射后第2天给药,连续16周〕.计数大鼠肝肿瘤结节数并称量瘤质量;比色法测定血清γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)和碱性磷酸酶(AKP)活性及羟脯氨酸含量;HE染色观察肝组织病理变化;ELISA检测血清甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)和异常凝血酶原(APT)含量;Gomori银染法检测肝组织网状纤维水平;免疫组化法检测肝组织中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白的表达;Western印迹法检测肝组织中促细胞丝裂原细胞外激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路相关蛋白表达水平.结果 给药16周后,与正常对照组相比,模型组肝肿瘤结节数和瘤质量显著增加,血清γ-GT和AKP活性及羟脯氨酸含量明显升高(P<0.01);肝小叶结构破坏区域增加,细胞出现多核、核固缩、核内空泡等现象;AFP,AFP-L3和APT水平明显升高(P<0.05,P<0.01);网状纤维塌陷、融合、包裹形成假小叶;肝组织ERK,MEK和P90RSK磷酸化水平均明显升高(P<0.01).与模型组相比,JS-K各给药组大鼠肝肿瘤结节数和瘤质量显著减少(P<0.05,P<0.01);血清中γ-GT和AKP活性及羟脯氨酸含量明显降低(P<0.01);肝小叶结构相对较好,癌细胞分化程度高;AFP,AFP-L3和APT含量明显降低(P<0.05,P<0.01);网状纤维阳性表达区显著减少(P<0.01),大鼠肝组织ERK,MEK和P90RSK蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.01).结论 偶氮鎓二醇盐衍生物通过抑制MEK/ERK通路干预肝纤维化进程,从而对大鼠原发性肝癌具有一定的抑制作用.