人参属中药材高分辨率熔解曲线鉴定及其方法学考察

摘要

目的:建立基于高分辨率熔解曲线鉴别人参属中药材的方法,并进行系统性方法学考察。方法:采集不同产地的人参属中药材人参、西洋参、三七以及市场上常见混伪品竹节参、珠子参、羽叶三七。所有样品提取总DNA,筛选合适的引物,构建人参属正品中药材熔解曲线。同时对不同比例混合样品进行了鉴别,对该方法的灵敏性与特异性、重复性、稳健性、检出限进行了系统性考察。结果:选择psbA-F/trnH-R引物,在模板质量浓度1.6~200 ng·μL^(-1),退火温度为54~60℃,引物浓度为0.1~0.3)μmol·L^(-1)范围内,对人参属中药材共75份样品进行高分辨熔解曲线分析人参、西洋参、三七、羽叶三七、竹节参、珠子参等均获得正确稳定的分析结果。结论:高分辨熔解曲线依据分型分析可以区分人参属中药材,并对其混伪品进行检测。在此基础上本文提出了中药分子鉴定方法学研究标准程序,为进一步规范中药分子鉴定方法学研究提供依据。